二氧化碳培養(yǎng)箱廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)細(xì)胞培養(yǎng)研究,典型的應(yīng)用領(lǐng)域包括醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)、微生物、農(nóng)業(yè)科學(xué)、藥物學(xué)的研究和生產(chǎn),其通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個(gè)類似細(xì)胞/組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境如恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、穩(wěn)定的溫度(37°C)、較高的相對(duì)濕度(95%),來對(duì)細(xì)胞/組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置。
用戶對(duì)培養(yǎng)箱都有兩條zui基本的要求,一是要求培養(yǎng)箱能夠?qū)囟?、濕度和二氧化碳濃度等提供zui穩(wěn)定的控制,以便于其研究工作的進(jìn)展;二是要求培養(yǎng)箱能夠?qū)ε囵B(yǎng)箱內(nèi)的微生物污染進(jìn)行有效的防范,并且能夠定期消除污染,以保護(hù)研究成果,防止樣品損失。
一、溫度控制
氣套式加熱和水套式加熱,兩種加熱系統(tǒng)都是和可靠的,同時(shí)它們都有著各自的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。水套式加熱是通過一個(gè)獨(dú)立的水套層包圍內(nèi)部的箱體來維持溫度恒定的,其優(yōu)點(diǎn):水是一種很好的絕熱物質(zhì),當(dāng)遇到斷電的時(shí)候,水套式系統(tǒng)就可以比較長時(shí)間的保持培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性(維持溫度恒定的時(shí)間是氣套式系統(tǒng)的3-4倍),有利于實(shí)驗(yàn)環(huán)境不太穩(wěn)定(如有用電限制,或者經(jīng)常停電)的用戶選用。氣套式加熱是通過遍布箱體氣套層內(nèi)的加熱器直接對(duì)內(nèi)箱體進(jìn)行加熱的,又叫六面直接加熱。氣套式與水套式相比,具有加熱快,溫度的恢復(fù)比水套式培養(yǎng)箱迅速的特點(diǎn),特別有利于需要箱門頻繁開關(guān)的培養(yǎng)。此外,對(duì)于使用者來說氣套式設(shè)計(jì)比水套式更簡單化(水套式需要對(duì)水箱進(jìn)行加水、清空和清洗,并要監(jiān)控水箱運(yùn)作的情況)。
二、CO2濃度的控制:
目前市面箱體,二氧化碳濃度的控制方式,主要通過紅外傳感器(IR)或熱導(dǎo)傳感器(TCD)進(jìn)行測量,通過內(nèi)置微電腦的調(diào)節(jié),實(shí)現(xiàn)對(duì)箱體內(nèi)二氧化碳濃度的監(jiān)控。兩種傳感器都是準(zhǔn)確的,但都各有優(yōu)缺點(diǎn)。熱導(dǎo)傳感器監(jiān)控CO2濃度的工作原理是基于對(duì)內(nèi)腔空氣熱導(dǎo)率的連續(xù)測量,輸入CO2氣體的低熱導(dǎo)率會(huì)使腔內(nèi)空氣的熱導(dǎo)率發(fā)生變化,這樣就會(huì)產(chǎn)生一個(gè)與CO2濃度直接成正比的電信號(hào)。紅外傳感器(IR)它是通過一個(gè)光學(xué)傳感器來檢測CO2的水平。IR系統(tǒng)包括一個(gè)紅外發(fā)射器和一個(gè)傳感器,當(dāng)箱體內(nèi)的CO2吸收了發(fā)射器發(fā)射的部分紅外線之后,傳感器就可以檢測出紅外線的減少量,而被吸收紅外線的量正好對(duì)應(yīng)于箱體內(nèi)CO2的水平,從而可以得出箱體內(nèi)CO2的濃度。由于IR系統(tǒng)是通過紅外線減少來確定箱內(nèi)CO2濃度,而箱體內(nèi)顆粒物能夠反射或部分吸收紅外線,使得IR系統(tǒng)對(duì)箱體內(nèi)顆粒物的多少比較敏感,因此IR傳感器應(yīng)用在含空氣過濾器的培養(yǎng)箱內(nèi)比較合適。
三、相對(duì)濕度:
箱內(nèi)濕度對(duì)于培養(yǎng)工作來說是一項(xiàng)非常重要然而又經(jīng)常被忽略的因素。維持足夠的濕度水平并且要有足夠快的濕度恢復(fù)速度(如在開關(guān)門后)才能保證不會(huì)由于過度干燥而導(dǎo)致培養(yǎng)失敗。用戶在選購培養(yǎng)箱的時(shí)候盡量選擇濕度揮發(fā)快的,具備引流風(fēng)道,更好的保證箱體內(nèi)快速達(dá)到zui大相對(duì)飽和濕度并且開關(guān)門后的濕度恢復(fù)的時(shí)間快速。BLLA直熱式二氧化碳培養(yǎng)箱底部無加熱水盤,內(nèi)膽采用斜膽式設(shè)計(jì),內(nèi)膽底部直接儲(chǔ)水,加濕用水直接倒入內(nèi)膽底部,這樣的話加濕用水與底部加熱體接觸面加大,同時(shí)濕氣蒸發(fā)面積也加大了,保證了培養(yǎng)箱內(nèi)濕度的快速恢復(fù);另內(nèi)膽采用斜膽式設(shè)計(jì),可以控制冷凝水的流動(dòng)方向,大大減少冷凝水在玻璃門上結(jié)露的機(jī)會(huì)。
四、防污染設(shè)計(jì)和消毒滅菌系統(tǒng):
污染是導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)失敗的一個(gè)主要因素,因而,培養(yǎng)箱的制造商們?cè)O(shè)計(jì)了多種不同的裝置去減少和防止污染的發(fā)生,其主要途徑都是盡量減少微生物可以生長的區(qū)域和表面,并結(jié)合自動(dòng)排除污染裝置來有效防止污染的產(chǎn)生。如帶有高溫濕熱滅菌、UV消毒、干熱滅菌等功能的培養(yǎng)箱,可實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)箱意外污染后的滅菌;另箱體內(nèi)部如有設(shè)計(jì)安裝了ULPA過濾器,能過濾培養(yǎng)箱內(nèi)空氣,可過濾除去99.999%的0.12微米以上的顆粒;此外,如箱體外部具有抗菌涂層,可以有效的抑制微生物在箱體表面的滋生。這些裝置對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)來說是*,那么對(duì)于培養(yǎng)箱來說,具有怎樣的消毒方式更適合呢?
首先,我們考慮的當(dāng)然是各種方式的滅菌能力,紫外消毒能力是與紫外燈距離目標(biāo)的距離的二次方成反比,距離越遠(yuǎn),消毒能力越差,所以紫外消毒方式有其局限性,難以達(dá)到*滅菌的要求;相比較而言,高溫消毒是目前比較有效消毒滅菌的方法,高溫消毒又分為兩類,一是傳統(tǒng)的高溫干熱消毒,另一種是先進(jìn)的高溫濕熱滅菌。接下來我們重點(diǎn)說一下高溫干熱和高溫濕熱兩種方法的優(yōu)劣。高溫濕熱由于蒸汽潛熱大,穿透力強(qiáng),容易使蛋白質(zhì)變性或凝固,因此該法的滅菌效率比干熱滅菌法高。其原因有三:①蛋白質(zhì)凝固所需的溫度與其含水量有關(guān),含水量愈大,發(fā)生凝固所需的溫度愈低。濕熱滅菌的菌體蛋白質(zhì)吸收水分,所以較同一溫度的干熱空氣中易于凝固。②濕熱滅菌過程中蒸汽放出大量潛熱,加速提高濕度。因而濕熱滅菌比干熱所需溫度低,如在同一溫度下,則濕熱滅菌所需時(shí)間比干熱短。③濕熱的穿透力比干熱大,使其深部也能達(dá)到滅菌溫度,故濕熱比干熱收效好一些。所以高溫消毒并不是簡單的看消毒溫度,主要是看是否濕熱消毒。BLLA直熱式二氧化碳培養(yǎng)箱采用90℃高溫濕熱滅菌,可有效地消滅幾乎所有微生物污染源。
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